Biofísica de Macromoléculas
A instalação oferece um conjunto de equipamentos destinados à caracterização bioquímica e biofísica de macromoléculas, abrangendo proteínas, enzimas e nanopolímeros como nanocelulose e derivados de lignina.
Nesta instalação, é possível realizar a caracterização funcional de proteínas purificadas até o estágio anterior à obtenção de dados estruturais. Além disso, a instalação oferece a conveniência de realizar medidas espectroscópicas de absorbância, caracterização de fluorescência intrínseca e extrínseca, fosforescência, bio e quimioluminescência em espectrofluorímetros. Também é possível investigar a homogeneidade estrutural de moléculas em solução, o que contribui para o controle de qualidade em ensaios estruturais por cristalografia de proteínas, criomicroscopia eletrônica ou espalhamento de raios X a baixo ângulo. Além disso, a infraestrutura da instalação é relevante para aplicações industriais, incluindo equipamentos para enzimologia fina e estudos de especificidade e mecanismos de ação.
Principais competências e técnicas experimentais:
- Comportamento hidrodinâmico e de cargas de macromoléculas;
- Determinação da composição estrutural e de termoestabilidade de macromoléculas;
- Caracterização de fluorescência, fosforescência, bio e quimioluminescência de macromoléculas;
- Determinação de parâmetros enzimáticos;
- Perfil de carboidratos e determinação de padrões de clivagem por CAZymes (carbohydrate-active enzymes);
- Separação e caracterização de macromoléculas com base no tamanho molecular e propriedades hidrodinâmicas;
- Determinação de parâmetros termodinâmicos de interações biomoleculares.
Equipamentos:
- DLS Malvern Zetasizer: espalhamento dinâmico de luz, capaz de investigar a homogeneidade estrutural das moléculas e a carga entre as partículas em solução (potencial zeta).
- Jasco J-815: espectropolarímetro de dicroísmo circular, capaz de determinar a composição da estrutura secundária das macromoléculas, além de investigar a termoestabilidade.
- Cary Eclipse e Tecan Infinite Microplate Reader: espectrofluorímetros para caracterização de fluorescência intrínseca e extrínseca, fosforescência, bio e quimioluminescência de macromoléculas.
- P/ACE MDQ Beckman Coulter: sistema de eletroforese capilar para estudos do perfil de carboidratos provenientes da hidrólise por enzimas glicosídicas.
- SEC-MALS / FFF-MALS (Wyatt Technology): espalhamento de luz estático em múltiplos ângulos acoplados a modo SEC ou FFF para determinação de tamanho molecular (massa molar absoluta), estado de agregação, conformação e interações intermoleculares. Permite a análise de uma ampla gama de amostras, incluindo aquelas com elevada heterogeneidade ou que apresentam interações indesejáveis com colunas cromatográficas. Detectores: DAWN8, Optilab e ViscoStar.
- MicroCal PEAQ-ITC Automated (Malvern Panalytical): calorimetria de titulação isotérmica (ITC) para determinar parâmetros termodinâmicos de interações bioquímicas. Caracterização de interações de pequenas moléculas, proteínas, anticorpos, ácidos nucleicos, lipídeos e outras biomoléculas. Também utilizado para cinética enzimática, o que permite quantificar a velocidade de uma reação ou efeitos de inibição diversos como mutações ou moléculas que competem com o substrato.
Início de operação: em 2014 e 2015 para usuários externos.